Com uma grande veia para o Humor e inspirado por grandes comediantes brasileiros, Gui Santana iniciou sua carreira artística no rádio em sua cidade natal ainda na adolescência. Ao vir para São Paulo estudar rádio e televisão, Gui participou do programa de calouros Quinta Categoria da MTV e lá deu seu pontapé inicial na televisão. Sua temporada no canal do rock durou 4 anos. Grandes obras como o Comédia MTV foram cruciais para expor seu jeito espontâneo e ingênuo de fazer humor. Em 2012 Gui Santana passou a ser um dos integrantes do Programa Pânico pela Rádio Jovem Pan e nas telas da Band, no Pânico na Band. Um salto muito grande na carreia, nos limites do humor e principalmente nos limites de seu próprio corpo. Em 2017 passou a ser o Zacarias no Remake de Os Trapalhões pela Rede Globo. Fez parte do elenco do Sitcom Tô de Graça pelo Multishow nos anos de 2017 e 2018. Ainda no ano de 2018, o comediante passou a dar vida ao personagem Nerso da Capitinga no REMAKE da Escolinha do Professor Raimundo pela Rede Globo. O programa  estendeu-se aos anos de 2019 e chegou ao fim em 2020. Atualmente Gui faz parte do quadro Paredão dos Famosos no programa Hora do Faro pela Rede Record.